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①取受體菌接種于BY培養(yǎng)液中，37℃培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長早中期。此時(shí)OD620應(yīng)在0.4左右，培養(yǎng)時(shí)間約為4～5小時(shí)。

②將培養(yǎng)后的菌液離心，棄去上清液，再用生長培養(yǎng)基（GM液）洗菌一次，然后將菌體細(xì)胞重新懸浮在與BY培養(yǎng)液等體積的GM液中。37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長后期。此時(shí)OD620應(yīng)在0.6～0.9，培養(yǎng)時(shí)間約為3～5小時(shí)。

③以1:10的比例將GM液中培養(yǎng)的菌液稀釋于轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基（TM液）中。即取菌液0.2ml加入1.8mlTM液中，在20×150mm的試管中，37℃振蕩培養(yǎng)90分鐘。

④加入供體質(zhì)粒，至最終濃度1ug/ml，于20×150mm的試管中，37℃振蕩培養(yǎng)30分鐘。

⑤取200ul涂布抗性選擇平板，37℃培養(yǎng)48小時(shí)。

【培養(yǎng)基配方】

A.        BY培養(yǎng)基：牛肉膏5g，酵母膏5g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，葡萄糖5g，蒸餾水1000ml，pH7.5。

B.        1×最低鹽溶液：K2HPO4 14g（K2HPO4?3H2O 18.34g），K2HPO4 6g，(NH4)2SO4 2g，檸檬酸鈉（Na3C6H5O7?2H2O）1g，MgSO4?7H2O 0.2g，在蒸餾水中依次溶解，加水至1000ml。

C.        L- trp溶液，2mg/ml，貯于棕色瓶內(nèi)，用黑紙包裹。（過濾滅菌）

D.        生長培養(yǎng)基：GM，使用時(shí)混合比例。1×最低鹽溶液100ml，1M硫酸鎂0.5ml，50%葡萄糖1ml，5%水解酪蛋白0.4ml，10%酵母汁1ml，L-trp 50ug/ml。

E.        轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基：TM，使用時(shí)混合比例。1×最低鹽溶液100ml，1M硫酸鎂0.5ml，50%葡萄糖1ml，5%水解酪蛋白0.2ml，L-trp 5ug/ml。

其中 50% 葡萄糖 過濾滅菌   5%水解酪蛋白和10%酵母汁均可高溫滅菌至于載體你可以試試 pAX01這是一個(gè)適用于芽孢桿菌屬的過表達(dá)載體